Le parcours consacré à Toulouse-Lautrec offre sur deux niveaux une découverte chronologique et une approche thématique de l'oeuvre. Sa technique lithographique et son processus créatif sont illustrés par la présentation des études et des dessins préparatoires au côté des 31 affiches qu'il a réalisées.
Un troisième niveau est consacré à une collection d'art moderne présentant les oeuvres d'amis et de contemporains de Toulouse-Lautrec, ainsi qu'un ensemble significatif d'artistes de la « Réalité poétique ».
La découverte du bâtiment et des espaces réhabilités s'accompagne de la création de galeries d'histoire dont l'une permet d'approfondir la connaissance du palais de la Berbie, à partir des découvertes archéologiques faites pendant le chantier de restructuration, et l'autre présente la cité épiscopale classée au patrimoine mondial de l'Humanité.